等溫滴定量熱法是近年來發(fā)展起來的一種研究生物熱力學(xué)與生物動(dòng)力學(xué)的重要方法，它通過高靈敏度、高自動(dòng)化的微量量熱儀連續(xù)、準(zhǔn)確地監(jiān)測(cè)和記錄一個(gè)變化過程的量熱曲線，原位、在線和無損傷地同時(shí)提供熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)信息。
在使用過程中會(huì)出現(xiàn)基線位置變化的問題，在這里整理了會(huì)影響基線位置的一些主要因素，
1.1 在安裝ITC儀器時(shí)，避免安裝在陽光直射的位置，以免導(dǎo)致長(zhǎng)時(shí)間的陽光直射造成溫度沿滴定針傳導(dǎo)至樣品池，造成基線的漂移。
1.2 在安裝ITC儀器時(shí)，不要安裝空調(diào)口直吹的位置，以免導(dǎo)致長(zhǎng)時(shí)間空調(diào)直吹造成溫度沿滴定針傳導(dǎo)至樣品池，造成基線的漂移。
1.3 人為操作的不小心，如滴定針不小心被碰彎了(經(jīng)常發(fā)生，當(dāng)?shù)味ㄡ樂旁赗est Position的時(shí)候，但是很多情況不容易發(fā)現(xiàn))，彎曲的滴定針有可能在滴定時(shí)持續(xù)摩擦樣品池側(cè)壁，造成樣品池溫度升高。
1.4 安裝的不到位或者固定的螺栓松了。在更換滴定針后滴定針有可能安裝不到位(露出Pipette底部的玻璃針管過長(zhǎng))或者長(zhǎng)時(shí)間使用后固定滴定針的螺栓發(fā)生松動(dòng)導(dǎo)致滴定針下沉，可能導(dǎo)致滴定時(shí)由于滴定針過長(zhǎng)摩擦樣品池底部，造成樣品池溫度升高。
1.5 攪拌速率的影響。不同的攪拌速率會(huì)帶來不同的熱量釋放(攪拌速率越高，溫度越高，基線越低，反之亦然。)。一般在ITC實(shí)驗(yàn)中，我們都設(shè)置的是恒定的攪拌速率，一般不會(huì)由于攪拌速率改變?cè)斐苫€的變化。但在某些Pipette故障或者樣品粘度較高造成攪拌器轉(zhuǎn)動(dòng)不均時(shí)，可能會(huì)導(dǎo)致樣品池?zé)崃康淖兓?/span>
1.6 樣品池中有氣泡。這個(gè)現(xiàn)象可能是最為常見的影響初始基線位置的原因了。樣品溫度、加樣技巧等都可能對(duì)基線有影響。當(dāng)樣品池中存在由于加樣或者樣品因溫度差脫氣造成的小氣泡時(shí)(由于水的比熱容要比空氣大，氣泡占據(jù)了水分子的位置導(dǎo)致樣品池中整體比熱容下降)，在給樣品池施加與參考池相同的功率時(shí)，樣品池的溫度會(huì)比參考池稍高，進(jìn)而使傳感器“誤認(rèn)為”樣品池更熱，從而減少給樣品池的功率，造成基線下降。在出色的操作技巧下，實(shí)際的初始基線一般和設(shè)定的Reference Power相差0.1ucal/s左右，當(dāng)然，一般情況下，±1 ucal/s的初始基線位置偏離一般是可以接受的。有一個(gè)需要注意的問題是，當(dāng)操作含有Detergent(如Triton X100, NP40等)的膜蛋白樣品時(shí)，建議小心的一次加樣完成，不建議通過吸打的方式排出氣泡，這樣可能會(huì)使問題更加嚴(yán)重
1.7 參考池中有氣泡。這個(gè)現(xiàn)象與上面描述的現(xiàn)象正好相反。
1.8 基線呈階梯狀下降(Step-wise decrease)。 當(dāng)?shù)味ㄡ樦袃H有空氣或者沒有完全充滿樣品時(shí)，在滴定過程中，隨著樣品的注入，樣品池中由于空氣的不斷注入導(dǎo)致樣品池的比熱容一直在降低，導(dǎo)致基線呈階梯狀下降；另一種可能的原因連接滴定針的Fill Port Adaptor (FPA) 磨損造成的，這種情況需要更換新的FPA；在使用ITC研究酶促動(dòng)力學(xué)的過程中，也會(huì)出現(xiàn)類似的現(xiàn)象，可以考慮反應(yīng)物之間是否存在可能的催化過程。
1.9 樣品池中未充滿。 當(dāng)樣品池沒有完全充滿時(shí)，隨著滴定針中反應(yīng)物的逐漸注入，樣品池逐漸充滿，導(dǎo)致樣品池中的比熱容逐漸提高，導(dǎo)致基線呈階梯狀上升。因此，請(qǐng)加滿280 ul樣品并排出氣泡。
